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  • 金達陽光

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    免疫組化Elivison二步法

    金達陽光 ? 2015-01-26 11:35:52 ? 來源:51jinda.com ? 點擊:2112

    1、石蠟切片置于67℃烘箱中,烘片2小時,脫蠟至水,用pH7.4的PBS沖洗三次,每次3分鐘(3×3’)。

    2、取一定量pH=6.0檸檬酸鹽緩沖液,加入微波盒中,微波加熱至沸騰,將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上,放入已沸騰的緩沖液中,中檔微波處理10分鐘,取出微波盒流水自然泠卻,從緩沖液中取出玻片,先用蒸餾水沖洗兩次,之后用PBS沖洗2×3’。(注:不是所有的抗體都需要微波修復的,視具體情況而定)

    3、每張切片加1滴3%H2O2,室溫下孵育10分鐘,以阻斷內源性過氧化物酶的活性。PBS沖洗3×3’。

    4、除去PBS液,每張切片加1滴相應的第一抗體(相應稀釋倍數),室溫下孵育2小時。

    5、PBS沖洗3×5’。除去PBS液,每張切片加1滴聚合物增強劑,室溫下孵育20分鐘。PBS沖洗3×3’。

    6、除去PBS液,每張切片加1滴酶標抗鼠/兔聚合物,室溫下孵育30分鐘。PBS沖洗3×5’。

    7、除去PBS液,每張切片加1滴新鮮配制的DAB液(二氨基聯苯胺),顯微鏡下觀察5分鐘。

    8、蘇木素復染,0.1%HCl分化,自來水沖洗,藍化,切片經梯度酒精脫水干燥,二甲苯透明,中性樹膠封固,晾干后觀察。

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