• <optgroup id="6kcoo"><option id="6kcoo"></option></optgroup><bdo id="6kcoo"><wbr id="6kcoo"></wbr></bdo>
    <strong id="6kcoo"></strong>
    <blockquote id="6kcoo"><wbr id="6kcoo"></wbr></blockquote>
  • 金達陽光

    24小時客戶服務熱線:
    010-59797112

    蛋白質凝膠電泳凝膠的制備

    金達陽光 ? 2015-01-26 11:15:33 ? 來源:51jinda.com ? 點擊:3224

    【材料與試劑】

    (1)30%的丙烯酰胺:分別稱取29g 丙烯酰胺,1g N,N -亞甲雙丙烯酰胺加溫熱的去離子水60ml,加熱至37℃溶解,補加水至終體積為100ml,過濾,即配成30%(w/v)丙烯酰胺貯存溶液。丙烯酰胺和雙丙烯酰胺在貯存過程中緩慢轉變為丙烯酸和雙丙烯酸,這一脫氨基反應是光催化或堿催化,故溶液的pH值不超過7.0,應置于棕色瓶中4℃保存。

    (2)10%十二烷基硫酸鈉(SDS):稱取10gSDS加去離子水90ml加熱至68℃,加幾滴濃鹽酸調節至pH7.2加水至100ml,即為10%(w/v)SDS。

    (3)濃縮膠緩沖液(1mol/L Tris-HCl pH 6.8):12.12g Tris溶解在80ml去離子水中,用濃鹽酸調節pH至6.8,再加去離子水至100ml。4℃保存。

    (4)分離膠緩沖液(1.5mol/L Tris-HCl pH 8.8):18.16g Tris溶解在80ml去離子水中,用濃鹽酸調節pH至8.8, 再加去離子水至100ml。4℃保存。

    (5)10%過硫酸胺(AP):過硫酸胺提供催化丙烯酰胺和雙丙烯酰胺聚合所必需的自由基,可用去離子水配制小量10%(W/V)貯存液并4℃保存。由于過硫酸胺會緩慢分解,故應隔周新鮮配制。

    (6)TEMED(N , N , N, N -四甲基乙二胺)TEMED通過催化過硫酸胺形成自由基而加速丙烯酰胺和雙丙烯酰胺的聚合,由于TEMED只能以游離堿的形式發揮作用,因此pH值較低時聚合反應受到抑制。

    (7)Tris-甘氨酸電泳緩沖液:分別稱取15.1g Tris 和94g甘氨酸,溶解在900 ml去離子水中,然后加入50 ml 10%(w/v)SDS,再加去離子水至1000 ml則成5?貯存液。使用時稀釋5倍,終濃度Tris為25mmol/L、甘氨酸為250mmol/L、0.1%SDS,緩沖液pH為(8.3)。

    (8)聚丙烯酰胺凝膠電泳槽和電泳儀

    (9)加樣器和吸頭等

    【操作方法】

    (1) 根據垂直電泳槽說明書安裝玻璃板,確定需配制分離膠的濃度和體積,按“配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分離膠所用溶液”所列成分(見書末附錄)配制所需分離膠;

    (2) 迅速將分離膠注入兩玻璃板間隙中,留出灌注積層膠所需空間(梳子的齒長再加1cm,用滴管小心地在分離膠上覆蓋一層0.1% SDS(當丙烯酰胺濃度≤8%時)或異丁醇或水(當丙烯酰胺濃度≥10%時),覆蓋層可防止氧擴散進入凝膠而抑制聚合反應。將凝膠垂直置于室溫下;

    (3) 分離膠聚合完全后,倒出覆蓋層液體,用去離子水洗滌凝膠頂部數次以除去未聚合的丙烯酰胺,盡可能排除凝膠上的液體;

    (4) 確定需配制濃縮膠的體積,按“配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳濃縮膠所用溶液”(見書末附錄)配制所需濃縮膠,然后直接將濃縮膠灌注在分離膠上,立即插入干凈的配套梳子,避免氣泡,然后加入濃縮膠溶液以充滿梳子之間的空隙。待濃縮膠聚合后,拔出梳子,形成加樣孔;

    (5) 用去離子水將Tris-甘氨酸電泳緩沖液貯存液稀釋5倍,倒入電泳槽,將加樣孔充滿,這時加樣孔中的氣泡可通過電泳緩沖液排除。

    代理品牌

    品牌目錄

    請聯系我們

    地址:北京市昌平區天通苑東一區6號樓5門二層

    電話:010-57790662 59797112

    傳真:010-81778195

    郵箱:info@51jinda.com

    微信關注 掃一掃
  • <optgroup id="6kcoo"><option id="6kcoo"></option></optgroup><bdo id="6kcoo"><wbr id="6kcoo"></wbr></bdo>
    <strong id="6kcoo"></strong>
    <blockquote id="6kcoo"><wbr id="6kcoo"></wbr></blockquote>
  • 日本在线高清在线视频h,deadlife漫画,闲人蜜桃综合网,小攻把小受做尿了漫画